尊龙凯时人生就博为您提供细胞培养和处理的详细说明书，确保您的实验成功和细胞活性。

一、细胞培养条件

细胞名称: 生长特性为贴壁生长，冻存条件为无血清冻存液。 培养体系: 1640培养基 + 10% FBS + 1% P/S + 1% 丙酮酸钠 + 1% L-谷氨酰胺。 传代方法: 建议首次按1:2的比例传代，细胞培养后每2天换液。 备注: 用无菌离心管收集培养基以便后续对比，如果对比培养效果不佳，建议选择尊龙凯时人生就博的完全培养基。

二、细胞收到后处理

收到细胞后，培养至良好状态，再填满完全培养液并封好瓶口，是运输细胞的最佳方式。使用75%酒精喷洒整个细胞瓶进行消毒后，在超净台内进行无菌操作。随后将细胞瓶放入37℃、5% CO2培养箱静置3-4小时，观察细胞生长情况，并拍照保存（建议40x、100x、200x各一张）。前三天的照片将作为重要售后依据，若不提供照片则默认状态良好。（传代后，一瓶使用原瓶的完全培养基，另一瓶使用自配的完全培养基以便对比，换液后轻松拧松瓶盖。）

三、细胞培养步骤

a、细胞传代

当细胞未超过80%汇合度时，将瓶中的培养液收集到离心管中，保留5ml完全培养基于37℃、5% CO2中培养；若细胞密度超80%，可开始传代，具体步骤如下：

1. 弃去培养上清，使用不含钙、镁的PBS细致洗涤细胞1-2次。
2. 加入约1-2ml的0.25%胰蛋白酶消化液，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，观察细胞是否大部分变圆并脱落，及时终止消化。
3. 轻轻吹打细胞使其完全脱落后吸出，将悬液转移至离心管，在1000 RPM条件下离心5分钟，弃去上清，加入1-2ml完全培养基重悬。
4. 按照1:2的比例进行分瓶传代（转移至两个T25瓶），并补充新的完全培养基至每瓶5-8ml，最后放置于37℃、5% CO2的细胞培养箱中继续培养。

b、细胞冻存

细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时，弃去T25培养瓶中的培养液并用PBS洗涤。添加约1ml的0.25%胰蛋白酶消化液，待细胞回缩后加入5ml完全培养液终止消化，轻轻吹打细胞使其脱落，转移至15ml离心管中，并在1000 RPM离心5分钟。弃去上清后，加入1ml的尊龙凯时人生就博无血清冻存液，混匀后转移到冻存管中，最后将冻存细胞直接放入-80℃冰箱中。

细胞复苏

从液氮中取出细胞冻存管（注意佩戴防护面具），迅速在37℃水浴中解冻，直至无冰晶后擦拭冻存管外壁。将细胞移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000 RPM离心5分钟。弃去上清后重悬于5ml完全培养基，接种于T25培养瓶中，并放入37℃、5% CO2培养箱中继续培养。第二天更换新鲜完全培养基。

注意事项

有些细胞在运输过程中可能会脱落，这是正常现象。如脱落较多，请将培养瓶内的所有培养液收集至离心管，及早进行处理和对比实验，确保细胞的生存状态。

五、售后条款

尊龙凯时人生就博承诺以下售后条款：若细胞在运输中出现问题，如细胞丢失、瓶身破损或培养液漏液，均可重发；对于细胞污染问题，请在收到48小时内提供真实实验结果以便核实。对培养状态良好且未通知的问题，将依据规定进行处理。

我们建议您遵循操作指引，以确保细胞的最佳生长状态。如需了解更多信息，请随时联系我们。尊龙凯时人生就博将竭诚为您提供优质的产品与服务。