校正染料(ROX)用于校正样品添加误差或孔间差异，能够提供一个稳定的基线，从而显著提升定量分析的精确度，增强重复管之间的数据重现性。需要注意的是，不同仪器对ROX的需求可能不同。在基线PCR的初始几个循环中，荧光信号几乎没有变化，阈值可以被认为是可信的最小荧光值，CT值则是扩增曲线与阈值交点的横坐标。

结果有效性判断

通过融解曲线的单峰特征(染料法)和扩增曲线的指数扩增区域来评估结果的有效性。复孔间CT值的标准差（STD）应小于0.2。阈值的设置必须合理，且应位于指数增长期内。虽然仪器会自动计算阈值，但并不是所有情况下都可以完全信任，必要时应进行手动调整。

气溶胶污染和基因组残留检查

NTC（无模板对照）用于确认无气溶胶污染，如果ΔCT=NTC(CT值) - 目的基因(CT值)≥3或≥5，则可认为气溶胶污染不会影响实验的准确性。同样，NRT（无逆转录对照）则确认无基因组残留，如果ΔCT=NRT(CT值) - 目的基因(CT值)≥3或≥5，则基因组残留对实验结果的准确性也不会产生影响。

扩增效率与品牌推荐

待测CT值应位于线性范围内，同时扩增效率应符合约定的PCR扩增效率标准(e)在90%-120%之间。

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